荧光定量PCR仪操作步骤
一、开机
开电脑显示屏电源,启动电脑,进入Windows NT操作系统,以用户名Administrator登陆,密码7900。待鼠标沙漏消失,电脑完全启动后,开电源,红橙绿灯依次闪动2次,然后绿灯点亮。双击桌面图标,打开SDS应用软件。
二、新建文件
菜单File → New,新建一个空白文件。Assay代表试验类型,实时定量选Absolute Quantification;终点读板选
Allelic Discrimination; Container指反应板类型,根据需要选择96孔板、384孔板或微量反应卡;Template项用于调用事先设置好的模板文件;Barcode是反应板的条形码,可以用扫描仪扫入或者手工输入设置完毕,点OK确认。
三、填样品表
设定Detector:菜单Tools→ Detector Manager,点New新建探针,设定名称、报告基团、淬灭基团等相关参数;选定探针后点Copy to Plate Document复制到板文件,指定各个孔所用探针、样品名和样品类型(未知样品、标准品和对照,标准品并输入拷贝数),扫描或输入条形码。
四、循环参数
切换到Instrument窗口,在Thermal profile选单下设定、修改PCR循环的温度、时间、反应体积等。其中Add A Dissociation Stage指令仪器进行融解曲线试验,只适用于SYBR Green I荧光染料法。
五、保存文件
设置完毕,保存文件;也可以保存为模板文件,方便以后调用。
六、启动PCR
在Instrument窗口点击Open/Close按钮,弹出样品架(在主机的右侧)。〔把样品板置入托盘,再单击Open/Close按钮,样品架自动收回并关闭上样门。按Start开始实验,开始时有样品架到位、扫描头到位、热盖升温等工作,等待出现Remain Time若干时间后即开始正式运行。
七、数据分析
实验结束,自动或手工设置基线和阈值,单击Analyze分析结果,切换到Result窗口查看扩增曲线、准曲线、原始数据、实验报告等试验结果保存数据,也可以Export各种数据。
★注意事项
1.注意本机的使用环境条件和电源。不宜在潮湿、暴晒环境中使用,远离水源、明火及腐蚀性物质。工作室温15~25℃,保证通风散热电源电压不能波动太大,以免损坏机内器件;
2.机盖开关要轻,以防损坏盖锁;
3.严禁工作时打开机盖;
4.定期用中性肥皂水清洗样品槽,严禁使用强酸、强碱、有机溶剂擦洗。
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